Kako ELISA setovi rade

Metoda sendviča s dvostrukim antitijelima 1. Pakiranje: S 0,05MPH9. karbonatno pakiranje je puferirano da se antitijelo razrijedi do sadržaja proteina od 1 do 10 ug/ml. Dodajte 0,1 ml, 4 stupnja C preko noći, u reakcijske otvore svake polistirenske ploče. Sljedeći dan bacite otopinu u rupu i isperite je 3 puta puferom za pranje po 3 minute svaki put.

(ukratko, pranje, isto ispod). 2. Dodavanje uzorka: Dodajte određeno razrjeđenje uzorka koji se testira 0,1 ml u gore-spomenutu reakcijsku rupu, inkubirajte 1 sat na 37 stupnjeva C. Zatim isperite.

(Istovremeno napravite praznu rupu, rupu za negativnu kontrolu i rupu za pozitivnu kontrolu). 3. Dodajte enzimom-označena antitijela: U svaku reakcijsku rupu dodajte svježe razrijeđeno enzimom-označeno antitijelo (razrjeđenje nakon titracije) 0,1 ml.

Inkubirajte 0,5 do 1 sat na 37 stupnjeva C i isperite.

4. Dodajte tekući zaslon u boji supstrata: dodajte privremeni pripravak otopine TMB supstrata 0,1 ml, 37 stupnjeva C 10 do 30 minuta u svaku reakcijsku rupu.

5. Završna reakcija: Dodajte 2M sumpornu kiselinu 0,05 ml u svaku reakcijsku rupu. 6. Rezultati određuju: mogu biti na bijeloj pozadini, izravno golim okom kako bi se promatrali rezultati: što je tamnija boja unutar reakcijske rupe, jači je pozitivan stupanj, negativna reakcija je bezbojna ili vrlo plitka, prema boji se odražava u dubini, na boju

Od skenirana vrijednost: na ELISA testeru, na 450 nm (ako je BTS reprodukcija boja, tada 410 nm), do prazne kontrolne nulte rupice unesene za mjerenje OD vrijednosti svake rupice, ako je veća od specificirane negativne kontrolne OD vrijednosti od 2,1 puta, to jest, pozitivna.

Posredno pravo

1. Upotrijebite paket za puferiranje za razrjeđivanje poznatog antigena na 1 do 10 mg/ml, po rupi plus 0,1 ml, 4 stupnja C preko noći;

2. Operite se 3 puta sljedeći dan;

3. Dodajte određeno razrjeđenje uzorka (nepoznato protutijelo) 0,1 ml u gore-spomenutu pakiranu reakcijsku rupu, inkubirajte 1 sat na 37 stupnjeva C, isperite;

4. (i slijepa proba, negativna i pozitivna kontrola rupice) u reakcijsku rupicu dodajte svježe razrijeđenu enzimsku oznaku drugog protutijela (anti-antitijela) 0,1 ml;

5,37 stupnjeva C inkubacija 35-60 minuta, ispiranje;

6.'Zadnji put kada se perete s DDW. Preostali koraci su isti kao "metoda sendviča s dvostrukim antitijelima" od 4, 5, 6.